1    微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)簡介

1.1 Ames試驗(yàn)發(fā)展歷程

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Bacterial Reverse Mutation Test) ，亦稱Ames試驗(yàn)，于1975年由美國加利福尼亞大學(xué)伯克利分校生化系B.N.Ames教授實(shí)驗(yàn)室建立并不斷發(fā)展完善，至今已成為基因毒性測試中應(yīng)用尤為廣泛的一種方法，通常是體外毒理學(xué)測試的第一步，廣泛應(yīng)用于化合物的致突變性和潛在致癌性的初篩檢驗(yàn)。近幾年，將M.H.L. Green等人創(chuàng)建的大腸桿菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)引入其中，形成現(xiàn)在較為成熟的細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（包括鼠傷寒沙門氏菌細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)和大腸桿菌細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)）。

1976年Green等通過改良建立了Ames波動(dòng)試驗(yàn)（Ames Fluctuation Test），它用液體培養(yǎng)基代替固體培養(yǎng)基，以觀察培養(yǎng)管的濁度或pH指示劑的顏色變化代替菌落計(jì)數(shù)，其敏感性高于Ames試驗(yàn)。

微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)試驗(yàn)（Micro-titre Fluctuation Ames Test）試驗(yàn)是在Ames波動(dòng)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的，由Gatehouse于1978年改良并不斷推廣，用96孔培養(yǎng)板進(jìn)行試驗(yàn)，以觀察pH指示劑的顏色變化指示結(jié)果，提高了靈敏度、并降低了化合物的用量。

后來，Gee等通過開發(fā)新菌株，建立了AmesⅡ試驗(yàn)，Gee等開發(fā)的6種沙門氏菌株（TA7001～TA7006）在組氨酸合成操縱子上各有一個(gè)*的點(diǎn)突變，這6種點(diǎn)突變包含了所有點(diǎn)突變的可能性，將6種菌株混合在一起（Tamix），即能夠檢測出所有可以誘發(fā)點(diǎn)突變的化合物，再配合一種傳統(tǒng)Ames試驗(yàn)中采用的菌株TA98（用于檢測移碼突變），就可以檢測出可以誘發(fā)點(diǎn)突變和移碼突變的化合物。

1.2 傳統(tǒng)Ames試驗(yàn)與微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)比較

傳統(tǒng) Ames 試驗(yàn)是對(duì)致癌物預(yù)測性遺傳毒性試驗(yàn)，是藥物遺傳毒性初篩的方法，也是QSAR構(gòu)效關(guān)系建立的遺傳毒性數(shù)據(jù)庫的重要數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。傳統(tǒng)的Ames平板滲入法采用半固體培養(yǎng)液，在有外源致突變物存在的情況下，組氨酸/色氨酸缺陷型菌株發(fā)生回復(fù)突變，回復(fù)為野生型，可在無組/色氨酸的培養(yǎng)基上生長，故可根據(jù)菌落形成數(shù)量，檢查受試物是否為致突變物。然而，開展傳統(tǒng)的Ames試驗(yàn)需4~5種菌株，試驗(yàn)過程涉及到培養(yǎng)大量的瓊脂平板以及繁復(fù)的平板菌落計(jì)數(shù)等，耗費(fèi)實(shí)驗(yàn)材料多，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且受試化合物用量大，敏感性低的缺點(diǎn)。

相比傳統(tǒng)的Ames試驗(yàn)方法，微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)采用了液態(tài)96孔板培養(yǎng)的方法，在微孔板中進(jìn)行受試物和菌株的孵育，利用培養(yǎng)基中的特殊指示劑溴甲酚紫顯色。當(dāng)孔中有回復(fù)突變的菌株生長使培養(yǎng)基pH值降低時(shí)，指示劑由紫色變?yōu)辄S色。外源化合物致突變能力越強(qiáng)，變色的孔數(shù)越多。通常，微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)選用TA98和TA100兩種菌株作為測試菌株，試驗(yàn)結(jié)果可通過計(jì)數(shù)變色的孔數(shù)或用酶標(biāo)儀直接讀數(shù)，省去了平板菌落計(jì)數(shù)的繁瑣和耗時(shí)的過程，且因其試驗(yàn)的全液體環(huán)境，使得試驗(yàn)靈敏度更高。

1.3 微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)的優(yōu)勢

l  高通量

微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)過計(jì)數(shù)黃色孔的數(shù)量來反映受試物的致突變性，從而省去了平板制作和菌落計(jì)數(shù)等步驟，可實(shí)現(xiàn)高通量、自動(dòng)化，具有節(jié)省耗材、節(jié)約藥量、縮短試驗(yàn)周期、結(jié)果客觀、適宜大量藥物篩選的優(yōu)點(diǎn)。

l  高靈敏度

波動(dòng)試驗(yàn)比平板試驗(yàn)靈敏，其主要原因可能是：①在波動(dòng)試驗(yàn)中細(xì)菌可在低濃度的誘變劑中處理較長時(shí)間；在平板試驗(yàn)中受測化學(xué)物將擴(kuò)散至底層瓊脂而被稀釋，因此產(chǎn)生同樣效應(yīng)需更高的起始濃度，而有些化學(xué)物濃度增高后又會(huì)導(dǎo)致毒性效應(yīng)。②液體培養(yǎng)有利于S9組份酶活性的正常發(fā)揮，在平板試驗(yàn)中可溶性酶擴(kuò)散入底層瓊脂會(huì)擾亂酶的代謝活力。

l  化合物用量少

Ames波動(dòng)試驗(yàn)是用96孔板進(jìn)行試驗(yàn)，化合物用量少，可作為新藥開發(fā)的早期，受試物樣品種類多、產(chǎn)量少或受試物較珍貴時(shí)評(píng)價(jià)遺傳毒性的快速方法。

2    IPHASE微量波動(dòng)Ames試劑盒

IPHASE/匯智和源順應(yīng)遺傳毒理研究的需求，通過多年的開發(fā)和優(yōu)化，推出了微量波動(dòng)Ames試劑盒，為遺傳毒理學(xué)研究提供了便捷的產(chǎn)品。

圖1 IPHASE微量波動(dòng)Ames試驗(yàn)試劑盒試驗(yàn)結(jié)果

2.1 微量波動(dòng)Ames試劑盒組成

 IPHASE/匯智和源微量波動(dòng)Ames試劑盒由A盒和B盒兩個(gè)包裝組成，包含了進(jìn)行試驗(yàn)所需的所有試劑和主要耗材，使用簡單、便捷。

2.2   微量波動(dòng)Ames試劑盒優(yōu)勢

l  便捷性 

省去誘導(dǎo)S9制備、菌株培養(yǎng)和鑒定、試劑配制時(shí)間，可以直接使用，大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期。

l  準(zhǔn)確性 

試劑盒各成分均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性高。

l  高效性 

利用顯色原理判斷受試物的致突變性，大大減少計(jì)數(shù)工作。

l  穩(wěn)定性 

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本試劑盒穩(wěn)定性強(qiáng)、易于運(yùn)輸和保存。

l  應(yīng)用廣 

應(yīng)用范圍廣，可用于食品、藥品、化妝品、化學(xué)品、保健品、農(nóng)藥等的遺傳毒性研究

3    相關(guān)產(chǎn)品

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類的科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品。

關(guān)    于    我    們

匯智和源，致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑，IPHASE為公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”